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2015年執(zhí)業(yè)藥師《中藥化學(xué)》考點(diǎn)復(fù)習(xí)
中藥有效成分的提取
(一)根據(jù)物質(zhì)溶解度差別進(jìn)行分離
1.結(jié)晶及重結(jié)晶法
利用不同溫度可引起物質(zhì)溶解度改變的性質(zhì)來(lái)分離物質(zhì)。選擇結(jié)晶溶劑的原則是：對(duì)要結(jié)晶的成分熱時(shí)溶解度大，冷時(shí)溶解度小，對(duì)雜質(zhì)冷熱都不溶或冷熱都易溶。另外要求結(jié)晶溶劑不與待結(jié)晶物質(zhì)發(fā)生化學(xué)反應(yīng);沸點(diǎn)較低、易揮發(fā);無(wú)毒或毒性很小。
判斷結(jié)晶純度的方法。
(1)晶型均一，色澤均勻。
(2)有一定的熔點(diǎn)和較小的熔距，熔距應(yīng)在2度以內(nèi)。
(3)TLC或PC分別用三種以上溶劑系統(tǒng)檢識(shí)，同單一圓整斑點(diǎn)。
(4)HPLC或GC檢查呈現(xiàn)單峰。
2.沉淀法
(1)在溶液中回入另一種溶劑以改變混合的極性，使一部分物質(zhì)沉淀析出。如：水提醇沉法(除去多糖或蛋白質(zhì));醇提水沉法(除去樹(shù)脂或葉綠素);醇提乙醚沉淀或丙酮沉淀法(使皂苷沉淀析出)
(2)pH法：對(duì)酸性、堿性或兩性有機(jī)化合物來(lái)說(shuō)，�？赏ㄟ^(guò)加入酸、堿以調(diào)節(jié)溶液的pH值，改變分子的存在狀態(tài)(游離型或解離型)，從而改變?nèi)芙舛榷鴮?shí)現(xiàn)分離。
酸提堿沉法(使生物堿類成分沉淀)。堿提酸沉法(使黃酮、蒽醌等沉淀);等電點(diǎn)法(使蛋白質(zhì)沉淀)
(3)鹽類沉淀法：通過(guò)加入某種沉淀試劑，使生成水不溶性的類沉淀。
(二)根據(jù)物質(zhì)在兩相溶劑中的分配比不同進(jìn)行分離
1.分配系數(shù)K
K=Cu/CL
K：表示分配系數(shù);Cu：表示溶質(zhì)在上相溶劑中的濃度;CL：表示溶質(zhì)在下相溶劑中的濃度。K越大越容易分離。
2.分離因子β
分離因子β可定義為A、B兩種溶質(zhì)在同一溶劑系統(tǒng)中分配系數(shù)的比值。
β=KA/KB
β越大越容易分離。
β≧100，僅作一次簡(jiǎn)單萃取就可實(shí)現(xiàn)基本分離;若100>β>10，則須萃取10～12次;β≧2時(shí)，要想實(shí)現(xiàn)分離，須做100次以上萃取才能完成;β≈1時(shí)，則KA≈KB，意味著兩者極其相近，即使作任意次分配也無(wú)法實(shí)現(xiàn)分離。
3.分配比與pH
對(duì)酸性、堿性及兩性有機(jī)化合物來(lái)說(shuō)，都具有游離型和解離型，二者可互相轉(zhuǎn)化，故在兩相中的分配比不同。
一般而言，pH<3時(shí)，酸性物質(zhì)多呈非解離狀態(tài)(HA)、堿性物質(zhì)呈解離狀態(tài)(BH+)存在，PH>12時(shí)，則酸性物質(zhì)呈解離狀態(tài)(A-)、堿性物質(zhì)呈非解離狀態(tài)(B)存在。
4.紙色譜
紙色譜屬于分配色譜，原理與液-液萃取法基本相同。
5.分配柱色譜
分離水溶性或極性較大的成分時(shí)，固定相多采用強(qiáng)極性溶劑，如水、緩沖溶液等，流動(dòng)相一般選擇極性相對(duì)較小的有機(jī)溶劑，稱為正相分配色譜;反相分配色譜。
(三)根據(jù)物質(zhì)的吸附性差別進(jìn)行分離
1.物理吸附基本規(guī)律 — 相似者易于及附
硅膠、氧化鋁是極性吸附劑，遵循“相似者易于吸附”的經(jīng)驗(yàn)規(guī)律�；钚蕴繛槭欠菢O性吸附劑，與硅膠、氧化鋁相反。
為避免發(fā)生化學(xué)吸附，酸性物質(zhì)宜用硅膠，堿性物質(zhì)則宜用氧化鋁進(jìn)行分離。
2.極性及其強(qiáng)弱判斷
化合物的極性由分子中所官能團(tuán)決定
3.吸附色譜法應(yīng)用
4.聚酰胺
聚酰胺吸附屬于氫鍵吸附，酰胺羰基與酚類、黃酮類化合物的酚羥基，或酰胺鍵上的游離氨基與醌類、脂肪羧酸上的羰基形成氫鍵締合而產(chǎn)生吸附。吸附強(qiáng)弱則取決于各種化合物與之形成氫鍵締合的能力。
聚酰胺特別適合分離酚類、醌類、黃酮類化合物。
(1)形成氫鍵的基團(tuán)數(shù)目越多，吸附能力越強(qiáng)。
(2)成鍵位置對(duì)吸附力也有影響。易形成分于內(nèi)氫鍵者，其在聚酰胺上的吸附相對(duì)減弱。
(3)分子中芳香化程度高者，則吸附性增強(qiáng);反之則減弱。
一般情況下，各種溶劑在聚酸胺術(shù)上的洗脫能力由弱至強(qiáng)，可大致排列成下列順序：
水→甲醇→氫氧化鈉水溶液→甲酰胺→二甲基甲酰胺→尿素水溶液
5.大孔吸附樹(shù)脂
(1)吸附原理
大孔吸附樹(shù)脂是吸附性和分子篩性原理相結(jié)合的分子材料。吸附性是由于范德華引力或產(chǎn)生氫鍵的結(jié)果，分子篩性是由于其本身多孔性結(jié)構(gòu)所決定的。
(2)影響吸附的因素
大孔吸附樹(shù)脂本身的性質(zhì)、溶劑的性質(zhì)和化合物的性質(zhì)是影響吸附的3個(gè)重要因素。
(3)大孔吸附樹(shù)脂的應(yīng)用
(4)洗脫液的選擇
洗脫液可使用甲醇、乙醇、丙醇、乙酸乙酯等。
(四)根據(jù)物質(zhì)分子大小差別進(jìn)行分離
物質(zhì)分子大小不同的化合物可用透析法、凝膠過(guò)濾法、超濾法、超速離心法等分離。
1.凝膠過(guò)濾法
凝膠過(guò)濾法也叫凝膠滲透色譜、分子篩過(guò)濾、排阻色譜，系利用分子篩分離物質(zhì)的一種方法。
常用的有葡聚糖凝膠(Sepadex-G)以及羥丙基葡聚糖凝膠(Sephadex-LH-20)。Sephadex G只適于在水中應(yīng)用。Sephadex LH-20既可在水中應(yīng)用，又可在由極性與非極性溶劑組成的混合溶劑中應(yīng)用。
2.膜過(guò)濾法
膜過(guò)濾法主要包括滲透、反滲透、超濾、電滲析、透析、液膜技術(shù)等。透析法多用于水溶性的大分子和小分子物質(zhì)的分離，如蛋白質(zhì)、酶、多糖分離過(guò)程中的脫鹽。按照孔徑大小，可將透析膜分為：微濾膜、超濾膜、反滲透膜、納米膜。
�、侪h(huán)烯醚萜苷易被水解，顏色變深。地黃及玄參等中藥在炮制及放置過(guò)程中變成黑色的原因。
(環(huán)烯醚萜苷水解生成的苷元為半縮醛結(jié)構(gòu)，其化學(xué)性質(zhì)活潑，容易進(jìn)一步發(fā)生氧化聚合等反應(yīng)，難以得到結(jié)晶性苷元，同時(shí)使顏色變深。)
�、谲赵鏊�、堿、羰基化合物和氨基酸等都能變色。
氨基酸反應(yīng)：環(huán)烯醚萜和氨基酸加熱，產(chǎn)生藍(lán)色沉淀。
乙酸-銅離子反應(yīng)：環(huán)烯醚萜的冰醋酸溶液，遇Cu2+加熱，產(chǎn)生藍(lán)色。
(七)皂苷顯色反應(yīng)
1.Liebermann反應(yīng)：
樣品溶于乙酐中，加入一滴濃硫酸，呈黃→紅→藍(lán)→紫→綠等顏色變化，最后褪色。
2.醋酐-濃硫酸(Liebermann-Burchard)反應(yīng)：
將樣品溶于醋酐中，加入濃硫酸-醋酐(1:20)數(shù)滴，呈色同上。此反應(yīng)可以區(qū)分三萜皂苷呈紅或紫色，甾體皂苷最終呈藍(lán)綠色。
3.三氯乙酸(Rosen-Heimer)反應(yīng)：
將含皂苷樣品的三氯甲烷溶液滴在濾紙上，加三氯乙酸試液一滴，加熱生成紅色漸變?yōu)樽仙�。在同樣條件下，甾體皂苷加熱至60 ℃顯色，三萜皂苷必須加熱至100℃才能顯色，也生成紅色漸變?yōu)樽仙�，可用于紙層析�?/p>
4.三氯甲烷-濃硫酸反應(yīng)：
樣品溶于三氯甲烷后加入濃硫酸，在三氯甲烷層呈現(xiàn)紅色或藍(lán)色，硫酸層有綠色的熒光。
5.五氯化銻反應(yīng)：
將皂苷樣品溶于三氯甲烷或醇后，點(diǎn)于濾紙上，噴以20%五氯化銻的三氯甲烷溶液(不應(yīng)含乙醇和水)，干燥后60～70℃加熱，顯藍(lán)色、灰藍(lán)色或灰紫色斑點(diǎn)。
6.芳香醛-硫酸或高氯酸反應(yīng)：
在使用芳香醛為顯色劑的反應(yīng)中，以香草醛最為普遍，其顯色靈敏，常作為甾體皂苷的顯色劑。除香草醛外，尚可應(yīng)用的還有對(duì)-二甲氨基苯甲醛。
糖的鑒定
苷類水解所得到的各種單糖和低聚糖的結(jié)構(gòu)大多數(shù)是已知的，只要與各種已知糖的標(biāo)準(zhǔn)品對(duì)照就可加以鑒定。但由于糖的水溶性很大，不易獲得結(jié)晶，有些物理常數(shù)無(wú)法測(cè)定，給印證工作帶來(lái)困難。以前多用化學(xué)方法制成衍生物，再作分離鑒定，步驟多，工作量大。而現(xiàn)在各種色譜技術(shù)的應(yīng)用，給糖類的鑒定帶來(lái)了極大的方便。
(一)紙色譜
(二)薄層色譜
(三)氣相色譜
(四)離子交換色譜
(五)液相色譜
糖鏈的結(jié)構(gòu)測(cè)定
要測(cè)定糖鏈的結(jié)構(gòu)主要是解決三個(gè)問(wèn)題：?jiǎn)翁堑慕M成、糖與糖的連接位置和順序、苷鍵的構(gòu)型。
(一)分子量的測(cè)定
苷的分子量測(cè)定目前大多采用質(zhì)譜法。但由于其極性大導(dǎo)致熱揮發(fā)性差，電子轟擊法(EI)和化學(xué)電離(CI)常不能得到理想的結(jié)果，一般采用場(chǎng)解吸(FD)、快原子轟擊(FAB)、電噴霧(ESI)等方法獲得[M+H]+、[M+Na]+等準(zhǔn)分子離子峰。
(二)單糖的鑒定
首先要了解苷中糖鏈由哪些單糖所組成，各種單糖之間的比例如何。一般是將苷鍵全部酸水解，然后用紙色譜檢出單糖的種類。經(jīng)顯色后用薄層掃描儀求得各種糖的分子比。單糖的定性定量也可以通過(guò)苷全甲基化并水解后得到的甲基化單糖的氣相色譜測(cè)定，但需要各種各樣的甲基化單糖作標(biāo)準(zhǔn)品。
(三)單糖之問(wèn)連接位置的確定
將苷全甲基化，然后水解苷鍵，鑒定所有獲得的甲基化單糖，其中游離的一OH的部位就是連接位置。水解要盡可能溫和，否則會(huì)發(fā)生去甲基化反應(yīng)和降解反應(yīng)。
(四)糖鏈連接順序的確定
(五)苷鍵構(gòu)型的決定
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