談?wù)匃晗惚Ｐ耐鑼夏陝用}粥樣硬化患者的影響論文
環(huán)氧化酶2 通過活化的巨噬細(xì)胞調(diào)節(jié)前列腺素的合成，與炎癥和動脈粥樣硬化的發(fā)生有關(guān)。本研究旨在觀察麝香保心丸對老年亞臨床動脈粥樣硬化患者外周血單核細(xì)胞環(huán)氧化酶2 表達(dá)的影響，闡釋麝香保心丸具有一定的抗炎作用，更有利于防治老年亞臨床動脈粥樣硬化患者發(fā)生心肌缺血而致心絞痛、胸悶及心肌梗死等。
1 資料與方法
1.1 研究對象
選擇我院2012 年3 月至2013 年2 月的34 例老年亞臨床動脈粥樣硬化患者，男性19 例，女性15 例，年齡67～79歲，平均(71±7)歲。納入條件：經(jīng)高分辨超聲檢測到頸動脈內(nèi)膜中層厚度(IMT)增厚(IMT≥1.0 mm)，知情同意者。排除條件：動脈血管嚴(yán)重粥樣硬化狹窄、嚴(yán)重肝、腎疾病、結(jié)締組織疾病、腫瘤、感染、高熱，近期服用抗生素、非甾體消炎藥等患者。
1.2 方法
1.2.1 超聲心動圖檢查：采用Sono5500 型彩色超聲心動圖儀，測量頸總動脈和椎動脈內(nèi)中膜厚度IMT，IMT≥1.0 mm 即為IMT 增厚。
1.2.2 采血和細(xì)胞分離及培養(yǎng)：服用麝香保心丸前和30 d 后分別采入選老年亞臨床動脈粥樣硬化患者外周靜脈血20 ml于無菌抗凝管中，用等倍稀釋Hank′s 液，制成細(xì)胞懸液;把淋巴細(xì)胞分離液加到透明無菌的離心管中(體積為細(xì)胞懸液體積的一半)，再將細(xì)胞懸液緩慢地加在分離液上面;使用2 000 r/min 離心20 min，用毛細(xì)吸管吸取中間的乳白色層于另一無菌離心管中;用5 倍體積的Hank′s 液重復(fù)離心洗滌2次，用RPMI 1640 培養(yǎng)液離心洗滌1 次，每次離心速度為1 500r/min，離心10 min，將洗滌后的細(xì)胞沉渣加入1 ml 含10%胎牛血清的.完全1640 培養(yǎng)液，進行細(xì)胞計數(shù)，并用2%錐蟲藍(lán)染色，計數(shù)活細(xì)胞，活細(xì)胞>95%;用RPMI 1640 培養(yǎng)液稀釋，置于4 個細(xì)胞培養(yǎng)孔中，每孔細(xì)胞數(shù)調(diào)定為1×107 個，37℃、5%CO2孵育箱中培養(yǎng)6 h，去除上清液，得到貼壁的單核細(xì)胞;各孔加入RPMI 1640 培養(yǎng)液5 ml 和脂多糖5 μg(終濃度1 mg/L)，37 ℃、5%CO2孵育箱中培養(yǎng)24 h 后收集貼壁細(xì)胞。
1.2.3 單核細(xì)胞總RNA 提取和RT-PCR 擴增：購買TAKARA 公司RTPCR 試劑盒，環(huán)氧化酶引物由上海博亞生物技術(shù)有限公司合成。用Trizol 方法提取單核細(xì)胞總RNA，按RT-PCR 試劑盒說明書逐步進行操作，將RNA 反轉(zhuǎn)錄為cDNA 后，進行PCR 擴增(用來擴增基因片斷)。上游引物，下游引物，擴增片斷為342 bp。內(nèi)參照Cyclophin 上游引物和下游引物，擴增片段206 bp。用94 ℃預(yù)變性3 min 后，再94 ℃變性50 s，55 ℃退火50 s，72 ℃延伸1 min，共38 個循環(huán)，72℃延伸10 min。PCR 產(chǎn)物采用1.5% 瓊脂糖凝膠電泳，在掃描分析儀上進行產(chǎn)物半定量分析，以環(huán)氧化酶2 的相對吸光度值表示，環(huán)氧化酶2 的相對吸光度值=環(huán)氧化酶2 吸光度值/Cyclophin 吸光度值。1.3 統(tǒng)計學(xué)方法采用SPPS12.0 統(tǒng)計軟件進行分析，計量資料采用t 檢驗，以x±s 表示，P<0.05 為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。
2 結(jié)果
服用麝香保心丸前和30 d 后，入選老年亞臨床動脈粥樣硬化患者外周血單核細(xì)胞環(huán)氧化酶2 mRNA 表達(dá)水平的比較：34 例治療前為1.58±0.22，治療后為0.76±0.14，治療前后比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。
3 討論
亞臨床動脈粥樣硬化也稱動脈粥樣硬化臨床前期病變，是指已有動脈粥樣硬化的客觀證據(jù)，尚無重要的動脈血管(如冠狀動脈、腦動脈、腎動脈及外周動脈)嚴(yán)重粥樣硬化狹窄導(dǎo)致明確的臨床癥狀和證據(jù)的情況，這部分患者具有較高的心腦血管事件或其他嚴(yán)重血管事件的風(fēng)險。對動脈粥樣硬化臨床前期病變積極早期干預(yù)有重要意義。本研究結(jié)果表明，老年亞臨床動脈粥樣硬化患者外周血單核細(xì)胞環(huán)氧化酶2 mRNA 表達(dá)明顯較高(環(huán)氧化酶2 的相對吸光度值高達(dá)1.58±0.22)，支持環(huán)氧化酶2 參與動脈粥樣硬化發(fā)展過程的觀點。環(huán)氧化酶2 還與前列腺素產(chǎn)物增加等有關(guān)，前列腺素產(chǎn)物能增加血管滲透性，促進單核細(xì)胞黏附，誘導(dǎo)巨噬細(xì)胞化學(xué)趨化性，促進巨噬細(xì)胞遷移，刺激炎性細(xì)胞因子產(chǎn)生，激活基質(zhì)金屬蛋白酶，并使白細(xì)胞和血小板活化。麝香保心丸主要成分麝香人參提取物牛黃肉桂蘇合香蟾酥冰片，具有芳香溫通益氣強心是心肌缺血引起的心絞痛胸悶及心肌梗死的安全有效的常用藥，能明顯降低動脈粥樣硬化患者的病死率和心腦血管事件發(fā)生率。本研究結(jié)果表明，采用麝香保心丸對老年亞臨床動脈粥樣硬化患者外周血單核細(xì)胞體外干預(yù)，能顯著降低老年亞臨床動脈粥樣硬化患者外周血單核細(xì)胞環(huán)氧化酶2 mRNA 表達(dá)[服用麝香保心丸30 d 后環(huán)氧化酶2 的相對吸光度值恢復(fù)至0.76±0.14 與治療前比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)]，說明麝香保心丸還具有抗炎等作用，更有利于防治老年亞臨床動脈粥樣硬化患者發(fā)生心肌缺血而致心絞痛、胸悶及心肌梗死等。
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